{"id":13712,"date":"2022-10-14T13:45:54","date_gmt":"2022-10-14T11:45:54","guid":{"rendered":"https:\/\/looketmedecine.fr\/?p=13712"},"modified":"2024-10-05T22:28:55","modified_gmt":"2024-10-05T20:28:55","slug":"lm3-un-autre-regard-regeneration-de-la-peau-avec-le-prp-ha-projets-suisses-de-recherche-translationnelle-des-experiences-in-vitro-et-in-vivo-aux-preuves-cliniques-dr-ali-modarressi-md-dr-sara","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/looketmedecine.fr\/en\/lm3-un-autre-regard-regeneration-de-la-peau-avec-le-prp-ha-projets-suisses-de-recherche-translationnelle-des-experiences-in-vitro-et-in-vivo-aux-preuves-cliniques-dr-ali-modarressi-md-dr-sara\/","title":{"rendered":"LM N\u00b0 2\/ 2022. Another look. Skin regeneration with PRP-(HA). Swiss translational research projects, from in vitro and in vivo experiments to clinical evidence. Dr Ali Modarressi MD, Dr Sarah Berndt Doctor of Biomedical and Pharmaceutical Sciences"},"content":{"rendered":"\t\t
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Un autre regard <\/strong><\/span><\/h1>

\u00a0<\/h2>\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t
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R\u00e9g\u00e9n\u00e9ration de la peau avec le PRP-(HA)\n\nProjets suisses de recherche translationnelle, \n\ndes exp\u00e9riences in vitro et in vivo aux preuves cliniques.\n<\/h1>\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t<\/div>\n\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t<\/section>\n\t\t\t\t
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Dr Ali Modaressi, MD (1)

Sarah Berndt, PhD (2)<\/h2>\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t
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1. Chirurgie plastique, reconstructive et esth\u00e9tique, <\/span><\/strong>Gen\u00e8ve (Suisse)<\/span><\/strong><\/p>

2. Docteur en sciences biom\u00e9dicales et pharmaceutiques<\/span><\/strong>
Responsable de la recherche en th\u00e9rapie cellulaire chez Regen Lab SA (Suisse)<\/span><\/strong><\/p>\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t<\/div>\n\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t<\/section>\n\t\t\t\t

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1. La recherche sur la th\u00e9rapie cellulaire :<\/h2>\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t
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La th\u00e9rapie cellulaire vise \u00e0 introduire de nouvelles cellules saines dans le corps d’un patient, pour remplacer les cellules endommag\u00e9es. <\/strong><\/span><\/p>

  • Ce type de th\u00e9rapie est un d\u00e9fi car il n\u00e9cessite un nombre suffisant de cellules \u00e0 transplanter chez le patient. <\/span><\/li>
  • En effet, les cellules sp\u00e9cialis\u00e9es, telles que les fibroblastes ou les cellules c\u00e9r\u00e9brales, sont difficiles \u00e0 obtenir \u00e0 partir du corps humain. <\/span><\/li>
  • De plus, les cellules sp\u00e9cialis\u00e9es ont g\u00e9n\u00e9ralement une capacit\u00e9 limit\u00e9e \u00e0 se multiplier, ce qui rend difficile la production d’un nombre suffisant de cellules n\u00e9cessaires \u00e0 certaines th\u00e9rapies cellulaires.<\/span><\/li><\/ul>

    Certains de ces probl\u00e8mes peuvent \u00eatre r\u00e9solus par l’utilisation de cellules souches.<\/strong><\/span> <\/span><\/p>

    • Les cellules souches<\/span> sont des cellules non sp\u00e9cialis\u00e9es qui ont la capacit\u00e9 de se d\u00e9velopper en d’autres types de cellules fonctionnelles. <\/span><\/li>
    • Il est important de noter que certains types de cellules souches peuvent \u00eatre cultiv\u00e9s en dehors du corps humain<\/span>, ce qui permet la production d’un grand nombre de cellules n\u00e9cessaires \u00e0 la r\u00e9ussite des applications de la th\u00e9rapie cellulaire en m\u00e9decine. <\/span><\/li>
    • Lorsqu’on utilise des cellules autologues, le patient est propri\u00e9taire de sa propre th\u00e9rapie.<\/span><\/li><\/ul>\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t
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      2. D\u00e9monstration de la s\u00e9curit\u00e9 et de l'efficacit\u00e9 dans les projets de recherche translationnelle : \u00e9tablissement de mod\u00e8les de culture de cellules 100% autologues. <\/h2>\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t
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      Ces derni\u00e8res ann\u00e9es, nous avons lanc\u00e9 un projet de recherche translationnelle qui a mis en \u00e9vidence l’effet prolif\u00e9ratif du PRP obtenu \u00e0 partir du sang du patient sur les cellules souches m\u00e9senchymateuses d\u00e9riv\u00e9es du tissu adipeux (ADSC) et les fibroblastes du m\u00eame patient [1-3] (Figure 1).<\/strong><\/span><\/p>

      • Notre objectif est d’\u00eatre totalement autologue afin de proposer des th\u00e9rapies personnalis\u00e9es. <\/span><\/li>
      • C’est pourquoi une gamme de dispositifs m\u00e9dicaux, CuteCell, d\u00e9di\u00e9e \u00e0 la culture in vitro de cellules humaines dans des laboratoires de recherche (installations GMP) a \u00e9t\u00e9 d\u00e9velopp\u00e9e.<\/span><\/li>
      • Ces dispositifs permettent la pr\u00e9paration de PRP (CuteCell-PRP), de s\u00e9rum (CuteCell-s\u00e9rum) et de PRP enrichi en MNC (CuteCell-MNC).<\/li>
      • Ces nouveaux produits offrent une alternative autologue au s\u00e9rum bovin f\u0153tal (FBS) dans les milieux de culture pour les th\u00e9rapies cellulaires [4].<\/li><\/ul>\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t
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        2.1 Cellules souches m\u00e9senchymateuses d\u00e9riv\u00e9es du tissu adipeux (ADSC)<\/h2>\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t
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        Le PRP acc\u00e9l\u00e8re l’expansion des cellules souches m\u00e9senchymateuses d\u00e9riv\u00e9es du tissu adipeux (ADSC). <\/strong><\/span><\/p>

        • Afin de d\u00e9finir un syst\u00e8me autologue pour la prolif\u00e9ration des ADSC, nous avons \u00e9valu\u00e9 l’efficacit\u00e9 du PRP autologue sur la prolif\u00e9ration des ADSC en comparaison avec le milieu classique suppl\u00e9ment\u00e9 en FBS. <\/span><\/li>
        • Nous avons \u00e9tudi\u00e9 la concentration optimale de PRP dans les milieux de culture.<\/span><\/li>
        • Les milieux de culture suppl\u00e9ment\u00e9s avec 20% de PRP pr\u00e9par\u00e9 \u00e0 partir du sang du patient ont augment\u00e9 de 14 fois la prolif\u00e9ration in vitro des ADSC par rapport au milieu de culture classique pr\u00e9par\u00e9 avec 10% de FBS pendant 10 jours [1] (Figure 2).<\/strong><\/span><\/li><\/ul>\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t
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          Figure 2 :<\/strong> Un milieu de culture compl\u00e9t\u00e9 par du PRP autologue augmente consid\u00e9rablement la prolif\u00e9ration in vitro par rapport \u00e0 un milieu de culture classique contenant 10% de FBS. Donn\u00e9es tir\u00e9es de Atashi et al. Tissue Engineering. Part C. 2014 [1].<\/em><\/span><\/p>\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t

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          Le PRP ne modifie pas le ph\u00e9notype des ADSC, leur capacit\u00e9 de diff\u00e9renciation et leur statut chromosomique.<\/strong><\/span><\/p>

          • Nous avons v\u00e9rifi\u00e9 que le potentiel de diff\u00e9renciation intrins\u00e8que des ADSC en adipocytes, ost\u00e9ocytes ou chondrocytes \u00e9tait conserv\u00e9 intact, quels que soient les suppl\u00e9ments utilis\u00e9s pour leur prolif\u00e9ration. <\/span><\/li>
          • Nous avons observ\u00e9 que le PRP n’avait pas d’effet n\u00e9gatif sur la capacit\u00e9 de diff\u00e9renciation des ADSC.<\/span><\/li>
          • Les potentiels de diff\u00e9renciation adipog\u00e9nique, chondrog\u00e9nique et ost\u00e9og\u00e9nique ont \u00e9t\u00e9 confirm\u00e9s et \u00e9taient qualitativement comparables \u00e0 ceux du FBS \u00e0 10% [1].<\/li>
          • L’analyse cytog\u00e9n\u00e9tique des cellules cultiv\u00e9es dans des conditions de 10% de FBS ou de 20% de PRP n’a pas montr\u00e9 de caryotype anormal.<\/li>
          • Les conditions de culture FBS et PRP pr\u00e9sentaient une stabilit\u00e9 num\u00e9rique et structurelle.<\/li><\/ul>

            Ainsi, le traitement des cellules avec du PRP ne modifie pas la stabilit\u00e9 chromosomique [1].<\/strong><\/span><\/p>\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t<\/div>\n\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t<\/section>\n\t\t\t\t

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            2.2. Fibroblastes dermiques humains (NHDF) : <\/h2>\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t
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            De nos jours, l’application de fibroblastes autologues pour la r\u00e9paration de la peau pr\u00e9sente un int\u00e9r\u00eat clinique important. <\/span><\/p>

            Dans la plupart des cas, la culture in vitro de cellules cutan\u00e9es est obligatoire. <\/span><\/p>

            Cependant, l’expansion cellulaire \u00e0 l’aide de milieux de culture x\u00e9nog\u00e9niques ou allog\u00e9niques pr\u00e9sente certains inconv\u00e9nients, tels que le risque de transmission d’infections ou une expansion cellulaire lente.<\/span><\/p>

            2.2.1. Am\u00e9lioration de l’expansion des fibroblastes gr\u00e2ce \u00e0 un traitement par PRP autologue<\/em>.<\/strong><\/span><\/h5>

            Dans cette \u00e9tude, nous avons pr\u00e9lev\u00e9 des fibroblastes et du sang sur les m\u00eames patients. <\/span><\/p>

            • Apr\u00e8s 7 jours de culture, les fibroblastes suppl\u00e9ment\u00e9s avec diff\u00e9rentes concentrations de PRP ont montr\u00e9 un nombre de cellules viables plus \u00e9lev\u00e9 par rapport aux milieux contenant du FBS (Figure 3).<\/span><\/li>
            • Cet effet prolif\u00e9ratif du PRP a suivi une courbe en forme de cloche dose-d\u00e9pendante.<\/li>
            • La condition de culture optimale \u00e9tait le PRP 20% o\u00f9 le nombre de NHDFs \u00e9tait 7,7 fois plus \u00e9lev\u00e9 que le FBS 10% [2,3].<\/li><\/ul>\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t
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              Figure 3 : <\/em><\/strong>Photographie optique en champ clair de NHDF en pr\u00e9sence de FBS 10% ou de PRP (5-20%) apr\u00e8s 7 jours de culture. Grossissement 10x. Les photos sont repr\u00e9sentatives d’un seul donneur. Donn\u00e9es de Berndt et al. Tissue Engineering. Part A. 2019 [3].<\/em><\/span><\/p>

              2.2.2. La concentration optimale de PRP est cruciale pour le maintien du ph\u00e9notype des fibroblastes.<\/em><\/strong><\/span><\/h5>
              • Les fibroblastes cultiv\u00e9s dans un milieu de culture classique suppl\u00e9ment\u00e9 en FBS pr\u00e9sentaient une forme cellulaire r\u00e9guli\u00e8re et aplatie, <\/span><\/li>
              • tandis que ceux trait\u00e9s avec du PRP (10-50 %) \u00e9taient fusiformes, une morphologie plus proche des cultures de matrice 3D ou du contexte in vivo.<\/span><\/li><\/ul>

                Nous avons cherch\u00e9 \u00e0 savoir si le changement morphologique survenant apr\u00e8s 7 jours de traitement par PRP \u00e9tait li\u00e9 \u00e0 un changement ph\u00e9notypique.<\/strong><\/span><\/p>

                • Nous avons d’abord d\u00e9montr\u00e9 une r\u00e9organisation importante de la F-actine, passant de la localisation de l’actine corticale (FBS 10 %) \u00e0 des filaments \u00e9pais traversant les cellules (PRP 20 %).<\/span><\/li>
                • Nous avons ensuite \u00e9valu\u00e9 les changements de l’expression d’alpha-SMA lors du traitement par PRP par cytom\u00e9trie en flux et analyses immunofluorescentes.<\/span><\/li>
                • L’expression d’alpha-SMA a augment\u00e9 de mani\u00e8re significative avec une concentration \u00e9lev\u00e9e de PRP (40-50%), tandis que les cellules trait\u00e9es avec FBS-10% et PRP 5-10% ont montr\u00e9 une coloration p\u00e9rinucl\u00e9aire basale.<\/li>
                • L’analyse par immunofluorescence a montr\u00e9 une augmentation de la coloration de la vimentine en pr\u00e9sence de PRP \u00e0 20 %, mais elle \u00e9tait compl\u00e8tement abolie \u00e0 une concentration \u00e9lev\u00e9e de PRP (PRP \u00e0 50 %) [3].<\/li><\/ul>

                  Ces r\u00e9sultats soulignent l’importance d’une concentration optimale de PRP. <\/strong><\/span>Ils confirment qu’une concentration \u00e9lev\u00e9e de plaquettes n’est pas meilleure qu’une concentration mod\u00e9r\u00e9e et pourrait m\u00eame \u00eatre nuisible [5,6].<\/strong><\/span><\/p>\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t

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                  2.2.3. Le PRP de CuteCell module l’activit\u00e9 m\u00e9tabolique, l’adh\u00e9sion des fibroblastes et favorise la migration.<\/em><\/strong><\/span><\/h5>

                  En utilisant un test m\u00e9tabolique MTT, nous avons mis en \u00e9vidence une augmentation des cellules trait\u00e9es par PRP. <\/span><\/p>

                  Ce qui refl\u00e8te directement une augmentation de l’activit\u00e9 m\u00e9tabolique des cellules, atteignant un pic de 3,12 fois dans les cellules trait\u00e9es par PRP 20%, par rapport aux cellules trait\u00e9es par FBS 10% apr\u00e8s 48 h de traitement.<\/span><\/p>

                  Pour caract\u00e9riser davantage les effets biologiques du PRP sur la biologie des fibroblastes, nous avons \u00e9valu\u00e9 l’effet du traitement PRP sur l’adh\u00e9sion des cellules \u00e0 la laminine et au collag\u00e8ne de type I.<\/strong><\/span><\/p>

                  • Le PRP a diminu\u00e9 l’attachement global des fibroblastes \u00e0 la laminine 4 h apr\u00e8s l’ensemencement. <\/span><\/li>
                  • Cet effet s’est produit d\u00e9j\u00e0 apr\u00e8s 15 min, avec une diminution de 21% de l’adh\u00e9sion globale des cellules. <\/span><\/li>
                  • Les m\u00eames r\u00e9sultats ont \u00e9t\u00e9 obtenus pour l’attachement des fibroblastes \u00e0 la matrice de collag\u00e8ne I (41% de l’adh\u00e9sion cellulaire totale apr\u00e8s 15 min). <\/span><\/li><\/ul>

                    Pour \u00e9tudier les propri\u00e9t\u00e9s migratoires des fibroblastes expos\u00e9s au PRP, nous avons r\u00e9alis\u00e9 un test de grattage in vitro (Figure 4).<\/strong><\/span><\/p>

                    • Huit heures de traitement par 20% de PRP ont induit une augmentation de 10% du nombre de cellules migrant de la marge de grattage vers la zone de grattage par rapport aux cultures cellulaires avec FBS. Ce front de migration \u00e9tait une migration cellulaire collective.<\/span><\/li>
                    • \u00c0 l’inverse, les fibroblastes expos\u00e9s \u00e0 10 % de FBS pr\u00e9sentaient des caract\u00e9ristiques de migration cellulaire isol\u00e9e [3].<\/span><\/li><\/ul>\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t
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                      Figure 4 :<\/strong> Effets cellulaires comparatifs du traitement par PRP 10% sur la migration cellulaire dans des cultures de fibroblastes. (A) Les fibroblastes en migration ont r\u00e9duit la largeur de la zone de grattage, comme le montre une coloration par immunofluorescence \u00e0 la phallo\u00efdine apr\u00e8s 8 heures. Le front de migration cellulaire est distribu\u00e9 de mani\u00e8re \u00e9gale le long de la fronti\u00e8re de grattage dans le FBS 10%, alors qu’il est moins homog\u00e8ne dans les cellules trait\u00e9es au PRP 10%. (B) Zoom sur les images montrant la migration cellulaire isol\u00e9e dans les cultures FBS 10% et la migration cellulaire collective dans les cultures PRP 10%. Donn\u00e9es de Berndt et al. Tissue Engineering. Part A. 2019 [3]. <\/em><\/span><\/p>\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t

                      \n\t\t\t\t
                      \n\t\t\t\t\t\t\t\t\t
                      2.2.4.Analyse du g\u00e9nome entier pour d\u00e9montrer que le PRP de CuteCell est s\u00fbr au niveau g\u00e9nomique.<\/em><\/strong><\/span><\/h5>

                      Pour documenter la stabilit\u00e9 g\u00e9n\u00e9tique pendant la prolif\u00e9ration, nous avons cultiv\u00e9 des NHDF pendant 4 jours avec des milieux suppl\u00e9ment\u00e9s en FBS 10 % ou en PRP 10 %. <\/span><\/p>

                      L’analyse CGH en r\u00e9seau des cellules trait\u00e9es avec les deux milieux de culture diff\u00e9rents n’a pas montr\u00e9 de r\u00e9arrangements chromosomiques d\u00e9s\u00e9quilibr\u00e9s. <\/span><\/p>

                      L’augmentation du taux de prolif\u00e9ration en r\u00e9ponse au traitement par PRP n’a pas provoqu\u00e9 d’instabilit\u00e9 g\u00e9nomique [3]. <\/strong><\/span><\/p>

                      Ces r\u00e9sultats sont de premi\u00e8re importance car certaines \u00e9tudes affirment que les facteurs de croissance lib\u00e9r\u00e9s par le PRP peuvent contribuer \u00e0 la progression tumorale [7].<\/span><\/strong><\/p>\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t<\/div>\n\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t<\/section>\n\t\t\t\t

                      \n\t\t\t\t\t\t
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                      \n\t\t\t\t\t

                      3. L'angiogen\u00e8se est modul\u00e9e de mani\u00e8re diff\u00e9rentielle par les pr\u00e9parations d\u00e9riv\u00e9es des plaquettes <\/h2>\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t
                      \n\t\t\t\t
                      \n\t\t\t\t\t\t\t\t\t

                      Dans le cadre de la r\u00e9g\u00e9n\u00e9ration tissulaire, l’angiogen\u00e8se th\u00e9rapeutique vise \u00e0 restaurer un syst\u00e8me vasculaire appropri\u00e9 par l’administration de facteurs de croissance exog\u00e8nes, de cytokines et de chimiokines, entre autres. <\/strong><\/span><\/p>

                      Les facteurs angiog\u00e9niques importants sont: <\/span><\/p>

                      • le VEGF, <\/span><\/li>
                      • l’angiopo\u00ef\u00e9tine, <\/span><\/li>
                      • le FGF, <\/span><\/li>
                      • le HGF, <\/span><\/li>
                      • le PDGF <\/span><\/li>
                      • et le TGF<\/span><\/li>
                      • bien qu’une myriade d’autres prot\u00e9ines soient \u00e9galement connues pour \u00eatre impliqu\u00e9es dans la formation des vaisseaux sanguins. <\/span><\/li><\/ul>

                        La lib\u00e9ration de produits d\u00e9riv\u00e9s des plaquettes, tels que des facteurs de croissance autologues, des cytokines et des chimiokines, peut d\u00e9clencher une angiogen\u00e8se th\u00e9rapeutique. <\/strong><\/span><\/p>

                        Dans une \u00e9tude in vitro, nous avons \u00e9valu\u00e9 et compar\u00e9 la capacit\u00e9 de trois pr\u00e9parations d\u00e9riv\u00e9es de plaquettes : <\/span><\/p>

                        • le plasma riche en plaquettes (PRP), <\/span><\/li>
                        • l’acide hyaluronique du PRP (PRP-HA) <\/span><\/li>
                        • et les lysats de plaquettes (PL) \u00e0 diff\u00e9rentes concentrations (5-40%) pour moduler les effets biologiques des cellules endoth\u00e9liales de la veine ombilicale humaine (HUVEC) sur le m\u00e9tabolisme,<\/span><\/li>
                        • la viabilit\u00e9, <\/span><\/li>
                        • la s\u00e9nescence, <\/span><\/li>
                        • la s\u00e9cr\u00e9tion de facteurs angiog\u00e9niques <\/span><\/li>
                        • et les capacit\u00e9s angiog\u00e9niques en 2D (test de formation de tube endoth\u00e9lial ou EFTA) <\/span><\/li>
                        • et en 3D (test des billes de fibrine ou FBA) [8].<\/span><\/li><\/ul>\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t
                          \n\t\t\t\t
                          \n\t\t\t\t\t\t\t\t\t
                          3.1. Le PRP et le PRP-HA modulent les activit\u00e9s angiog\u00e9niques des cellules endoth\u00e9liales (HUVEC) en 3D.<\/em><\/strong><\/span><\/h5>\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t
                          \n\t\t\t\t
                          \n\t\t\t\t\t\t\t\t\t

                          Dans ce travail, nous avons utilis\u00e9 un test d’angiogen\u00e8se 3D in vitro \u00e0 haut d\u00e9bit (le fibrin bead assay ou FBA) pour mod\u00e9liser l’effet angiog\u00e9nique des pr\u00e9parations d\u00e9riv\u00e9es des plaquettes utilis\u00e9es dans les \u00e9tudes d’ing\u00e9nierie tissulaire ou en clinique (Figure 5A).<\/strong><\/span><\/p>

                          • Nous avons test\u00e9 une gamme de concentrations (5 \u00e0 40 %) de PRP standardis\u00e9 de CuteCell, CM-PRP-HA, obtenu avec le tube Cellular Matrix BCT-HA, et une pr\u00e9paration commerciale de lysats plaquettaires. <\/span>Les \u00e9chantillons de sang ont \u00e9t\u00e9 obtenus \u00e0 partir de donneurs sains.<\/span><\/li>
                          • La proc\u00e9dure \u00e9tait conforme aux principes de la D\u00e9claration d’Helsinki et a \u00e9t\u00e9 approuv\u00e9e par la commission cantonale genevoise d’\u00e9thique et de recherche (ID 2017-00700, approuv\u00e9e le 18 octobre 2018). <\/span><\/li>
                          • Le FBA utilise\u00a0 une culture de cellules endoth\u00e9liales (CE) \u00e0 la surface de microsph\u00e8res Cytodex-3 d’une taille de ~200 \u03bcm int\u00e9gr\u00e9es dans une matrice de fibrine bovine 3D, avec des fibroblastes dermiques humains normaux (NHDF) utilis\u00e9s comme cellules nourrici\u00e8res. <\/span><\/li>
                          • Ces cellules stromales fournissent divers facteurs de croissance angiog\u00e9niques : <\/strong><\/span>
                            • facteur de croissance des h\u00e9patocytes (HGF), <\/span><\/li>
                            • facteur de croissance transformant alpha (TGF-\u03b1), <\/span><\/li>
                            • angiopo\u00ef\u00e9tine-1 (Ang-1), <\/span><\/li>
                            • ainsi que des mol\u00e9cules matricielles, <\/span><\/li>
                            • des prot\u00e9ines modifiant la matrice des prot\u00e9ines matricellulaires, par ex:\u00a0<\/span>
                              • procollag\u00e8ne C endopeptidase enhancer 1, <\/span><\/li>
                              • prot\u00e9ine s\u00e9cr\u00e9t\u00e9e acide et riche en cyst\u00e9ine (SPARC), <\/span><\/li>
                              • prot\u00e9ine Ig-H3 induite par le facteur de croissance transformant-\u03b2 (\u03b2IgH3)<\/span><\/li>
                              • et prot\u00e9ine 7 liant le facteur de croissance analogue \u00e0 l’insuline (IGFBP7)). [9].<\/span><\/li><\/ul><\/li><\/ul><\/li><\/ul>

                                Dans les conditions de contr\u00f4le, la germination des n\u00e9ovaisseaux est apparente entre les jours 2 et 3, et les cultures sont imag\u00e9es au jour 4. <\/span><\/strong><\/p>

                                • Pour la quantification de la germination du r\u00e9seau de microvaisseaux, les \u00e9chantillons sont automatiquement scann\u00e9s avec un imageur \u00e0 haut d\u00e9bit et l’analyse des images de microsph\u00e8res est effectu\u00e9e en utilisant une m\u00e9thode que nous avons d\u00e9velopp\u00e9e avec le logiciel ImageJ (Figure 5B) [10,11].<\/span><\/li>
                                • Ce test repr\u00e9sente une am\u00e9lioration significative par rapport aux tests angiog\u00e9niques conventionnels \u00e0 cellule unique, car l’inclusion de plusieurs types de cellules reproduit plus fid\u00e8lement l’environnement physiologique [9].<\/li>
                                • Les \u00e9tapes fondamentales de l’angiogen\u00e8se par germination comprennent <\/span><\/strong>
                                  • la d\u00e9gradation enzymatique de la membrane basale des capillaires, <\/span><\/li>
                                  • la prolif\u00e9ration des cellules endoth\u00e9liales (CE), la migration dirig\u00e9e des CE,<\/span><\/li>
                                  • la tubulogen\u00e8se (formation de tubes par les CE), <\/span><\/li>
                                  • la fusion des vaisseaux, <\/span><\/li>
                                  • l’\u00e9lagage des vaisseaux <\/span><\/li>
                                  • et la stabilisation des p\u00e9ricytes.<\/span><\/li><\/ul><\/li><\/ul>

                                    \u00a0<\/p>

                                    • Les pr\u00e9parations d\u00e9riv\u00e9es des plaquettes provoquent diff\u00e9rentes r\u00e9ponses angiog\u00e9niques lorsqu’elles sont test\u00e9es dans le FBA o\u00f9 elles agissent sur diff\u00e9rentes \u00e9tapes du processus angiog\u00e9nique.<\/span><\/li>
                                    • Gr\u00e2ce \u00e0 la puissante m\u00e9thode de quantification automatique que nous avons d\u00e9velopp\u00e9e [10], nous pouvons \u00e9valuer la modulation des param\u00e8tres morphom\u00e9triques des n\u00e9ovaisseaux form\u00e9s dans la matrice de fibrine.<\/li>
                                    • Il s’agit par exemple de la longueur totale du r\u00e9seau microvasculaire, des anastomoses dans les vaisseaux (branches), du nombre de capillaires issus des bourrelets (ancrage), et du nombre de pointes de vaisseaux montrant la complexit\u00e9 du r\u00e9seau (extr\u00e9mit\u00e9s) (Figure 5B).<\/li>
                                    • Dans notre \u00e9tude, les pr\u00e9parations les plus puissantes \u00e9taient le PRP et le CM-PRP-HA, car la longueur totale du r\u00e9seau n\u00e9ovasculaire, la longueur totale des branches, des extr\u00e9mit\u00e9s et de l’ancrage \u00e9taient fortement stimul\u00e9es par rapport aux conditions de contr\u00f4le (VEGF+\/traitement \u00e0 l’h\u00e9parine) (Figure 5C).<\/li><\/ul>

                                      Les pr\u00e9parations de plaquettes ont stimul\u00e9 toutes les \u00e9tapes du processus angiog\u00e9nique, la microscopie optique ayant permis d’observer la germination massive d’un r\u00e9seau ramifi\u00e9 de microvaisseaux (Figure 5A). <\/span><\/p>

                                      Le PRP \u00e9tait la pr\u00e9paration angiog\u00e9nique la plus puissante, stimulant significativement l’angiogen\u00e8se de 2 \u00e0 12 fois selon la concentration de PRP utilis\u00e9e et le param\u00e8tre d’int\u00e9r\u00eat (Figure 5C).<\/strong><\/span><\/p>

                                      • Une angiogen\u00e8se significative \u00e9tait d\u00e9j\u00e0 observ\u00e9e avec la plus faible concentration de PRP (5 %). <\/span><\/li>
                                      • Le CM-PRP-HA a \u00e9galement stimul\u00e9 l’angiogen\u00e8se mais dans une moindre mesure que le PRP : cela peut s’expliquer par le fait que la concentration de plaquettes dans cette pr\u00e9paration est r\u00e9duite de moiti\u00e9 par rapport au PRP.<\/span><\/li>
                                      • Les lysats de plaquettes devaient \u00eatre hautement concentr\u00e9s pour provoquer la m\u00eame r\u00e9ponse angiog\u00e9nique que le PRP et le CM-PRP-HA [8].<\/li><\/ul>\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t
                                        \n\t\t\t\t
                                        \n\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\"\"\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t
                                        \n\t\t\t\t
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                                        Figure 5 :<\/strong> Les produits d\u00e9riv\u00e9s des plaquettes modulent diff\u00e9remment l’angiogen\u00e8se dans le test des billes de fibrine en 3D. <\/strong><\/em><\/span><\/p>

                                        • (A) Des cultures 3D de HUVEC ont \u00e9t\u00e9 trait\u00e9es avec des produits d\u00e9riv\u00e9s de plaquettes (PRP, PRP-HA et PL) \u00e0 diff\u00e9rentes concentrations pendant 4 jours. Images repr\u00e9sentatives d’une augmentation massive de l’angiogen\u00e8se (PRP 20, PRP-HA 20) ou d’une l\u00e9g\u00e8re prolif\u00e9ration endoth\u00e9liale \u00e0 partir des billes recouvertes de CE (PL20) par rapport aux conditions de contr\u00f4le (contr\u00f4le et h\u00e9parine) au jour 4. Barre d’\u00e9chelle : 150 \u03bcm. <\/em><\/span><\/li>
                                        • (B) Images repr\u00e9sentatives de l’angiogen\u00e8se am\u00e9lior\u00e9e. Perles de microcarrier Cytodex recouvertes de HUVECs pr\u00e9sentant une croissance pseudo-capillaire apr\u00e8s analyse automatique avec un plugin sp\u00e9cifique d\u00e9velopp\u00e9 pour le logiciel Image J [11] ; certains des param\u00e8tres morphom\u00e9triques d’int\u00e9r\u00eat sont indiqu\u00e9s.\u00a0<\/em><\/span><\/li>
                                        • (C) La quantification des param\u00e8tres morphom\u00e9triques du r\u00e9seau capillaire a \u00e9t\u00e9 r\u00e9alis\u00e9e par une m\u00e9thode informatis\u00e9e (gr\u00e2ce au logiciel opensource Image J) sur des photos prises au jour 4. <\/em><\/span><\/li>
                                        • Les param\u00e8tres repr\u00e9sentatifs mesur\u00e9s \u00e9taient la longueur totale, la longueur totale des branches, le nombre d’extr\u00e9mit\u00e9s et le nombre de jonctions d’ancrage par sph\u00e8re. <\/em><\/span><\/li><\/ul>

                                          Donn\u00e9es de Berndt et al. Biomedicines. 2021 [8]. <\/em><\/span><\/strong><\/p>\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t

                                          \n\t\t\t\t
                                          \n\t\t\t\t\t\t\t\t\t
                                          3.2. Effet sur la viabilit\u00e9 et la s\u00e9nescence des HUVEC<\/strong>.<\/strong><\/em><\/span><\/h5>\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t
                                          \n\t\t\t\t
                                          \n\t\t\t\t\t\t\t\t\t

                                          Pour \u00e9valuer la viabilit\u00e9 des cellules, nous avons ajout\u00e9 du cristal violet comme colorant afin d’\u00e9tudier l’effet des produits d\u00e9riv\u00e9s des plaquettes sur la viabilit\u00e9 des cellules (Figure 6C). <\/strong><\/span><\/p>

                                          • Apr\u00e8s 3 jours de traitement, davantage de cellules violettes viables ont \u00e9t\u00e9 trouv\u00e9es dans les cultures trait\u00e9es par PRP et PRP-HA. <\/span><\/li>
                                          • Le PRP et le PRP-HA (10-40 %) ont augment\u00e9 la viabilit\u00e9 cellulaire de mani\u00e8re dose-d\u00e9pendante par rapport aux conditions de contr\u00f4le.<\/span><\/li>
                                          • La PL a \u00e9galement augment\u00e9 la viabilit\u00e9 cellulaire mais dans une moindre mesure [8].<\/span><\/li>
                                          • Pour \u00e9valuer l’effet des pr\u00e9parations d\u00e9riv\u00e9es des plaquettes sur la s\u00e9nescence des HUVEC, nous avons induit un vieillissement in vitro en cultivant les cellules \u00e0 une faible densit\u00e9 [12] des passages 2 \u00e0 6.<\/span>
                                            • Le vieillissement in vitro induit une augmentation de la taille des cellules et de leurs noyaux, et davantage de cellules apoptotiques apparaissent [13].<\/span><\/li>
                                            • Dans cet essai, nous avons test\u00e9 10% de FBS, 2UI\/mL d’h\u00e9parine, 10% de PRP, 10% de PRP-HA et 10% de PL.<\/span><\/li><\/ul><\/li><\/ul>

                                              La culture en s\u00e9rie \u00e0 long terme dans des milieux FBS ou h\u00e9parine a induit des cellules s\u00e9nescentes, alors qu’aucune cellule s\u00e9nescente n’a \u00e9t\u00e9 observ\u00e9e avec les traitements d\u00e9riv\u00e9s des plaquettes [8].<\/strong><\/span><\/p>\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t

                                              \n\t\t\t\t
                                              \n\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\"\"\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t
                                              \n\t\t\t\t
                                              \n\t\t\t\t\t\t\t\t\t

                                              Figure 6 : <\/em><\/strong><\/span><\/p>

                                              A. Viabilit\u00e9 des HUVEC \u00e9valu\u00e9e par coloration au cristal violet dans des cultures t\u00e9moins et dans des cultures trait\u00e9es par PRP, PRP-HA et PL. <\/em><\/span><\/p>

                                              B. Quantification de la quantit\u00e9 de colorant lib\u00e9r\u00e9 par mesure de l’absorbance (590 nm). <\/em><\/span><\/p>

                                              C. Coloration de la b\u00eata-galactosidase associ\u00e9e \u00e0 la s\u00e9nescence (SA–gal) des HUVEC (objectifs 20x) au passage 6 trait\u00e9es avec du FBS, de l’h\u00e9parine, 10 % de PRP, 10 % de PRP-HA ou 10 % de PL comme indiqu\u00e9 dans les figures. <\/em><\/span><\/p>

                                              Les cellules positives au b\u00eata-gal apparaissent en bleu dans les conditions de culture avec FBS et h\u00e9parine.<\/em><\/span><\/p>\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t

                                              \n\t\t\t\t
                                              \n\t\t\t\t\t

                                              4.Conclusions <\/h2>\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t
                                              \n\t\t\t\t
                                              \n\t\t\t\t\t\t\t\t\t

                                              La m\u00e9decine r\u00e9g\u00e9n\u00e9rative englobe un large \u00e9ventail de techniques visant \u00e0 r\u00e9parer, voire \u00e0 remplacer des tissus endommag\u00e9s ou \u00e2g\u00e9s. Parmi celles-ci, le plasma riche en plaquettes autologue est l’une des plus simples et des plus efficaces. Cette approche repose sur les capacit\u00e9s intrins\u00e8ques du corps humain \u00e0 se r\u00e9parer et sur le r\u00f4le des plaquettes dans ce processus.<\/span><\/p>

                                              L’utilisation du PRP standardis\u00e9, seul ou en combinaison, dans le cadre de la m\u00e9decine r\u00e9g\u00e9n\u00e9rative suscite un int\u00e9r\u00eat croissant car il repr\u00e9sente un traitement s\u00fbr et naturel, et il a d\u00e9montr\u00e9 jusqu’\u00e0 pr\u00e9sent des r\u00e9sultats prometteurs dans de nombreuses indications th\u00e9rapeutiques. <\/strong><\/span><\/p>

                                              Dans des \u00e9tudes cliniques, l’administration de PRP a montr\u00e9 une am\u00e9lioration significative:<\/strong><\/span><\/p>

                                              • de la cicatrisation des plaies [14], <\/span><\/li>
                                              • de la qualit\u00e9 et de la survie des greffes de graisse [15], <\/span><\/li>
                                              • de la restauration des cheveux [16] <\/span><\/li>
                                              • et de la qualit\u00e9 de la peau avec un effet anti-\u00e2ge [17].<\/span><\/li><\/ul>

                                                Toutes ces indications n\u00e9cessitent une augmentation de<\/span><\/p>

                                                • la prolif\u00e9ration des fibroblastes, <\/span><\/li>
                                                • de la production de collag\u00e8ne, <\/span><\/li>
                                                • de la stimulation des cellules souches <\/span><\/li>
                                                • et de la croissance de l’angiogen\u00e8se. <\/span><\/li><\/ul>

                                                  Il est int\u00e9ressant de noter que nos exp\u00e9riences in vitro et in vivo ont d\u00e9montr\u00e9 scientifiquement que le PRP am\u00e9liore ces \u00e9l\u00e9ments r\u00e9g\u00e9n\u00e9rateurs cl\u00e9s. <\/span>Ces r\u00e9sultats soutiennent notre traitement r\u00e9g\u00e9n\u00e9rateur quotidien avec le PRP en chirurgie plastique et en m\u00e9decine esth\u00e9tique, et d\u00e9montrent le m\u00e9canisme d’action.<\/span><\/p>

                                                  Le dispositif m\u00e9dical CuteCell a \u00e9t\u00e9 con\u00e7u et valid\u00e9 pour la culture cellulaire in vitro dans des conditions autologues qui respectent les directives GMP et les normes des agences r\u00e9glementaires. <\/strong><\/span><\/p>

                                                  Il a \u00e9t\u00e9 d\u00e9montr\u00e9 que CuteCell-PRP est un compl\u00e9ment biologique efficace, rentable et s\u00fbr pour les cultures de fibroblastes et de cellules souches adipeuses, ainsi qu’un substitut aux d\u00e9riv\u00e9s sanguins x\u00e9nog\u00e9niques ou allog\u00e9niques pour la validation de futurs protocoles cliniques d’expansion cellulaire in vitro. <\/span><\/p>

                                                  Nous avons montr\u00e9 que les produits d\u00e9riv\u00e9s des plaquettes sont des produits biologiques autologues qui stimulent l’angiogen\u00e8se in situ sans n\u00e9cessiter de greffe de mat\u00e9riel exog\u00e8ne pr\u00e9-vascularis\u00e9. <\/span><\/strong><\/p>

                                                  Le PRP et le PRP-HA ont \u00e9t\u00e9 les seules pr\u00e9parations permettant la r\u00e9alisation de l’ensemble du processus angiog\u00e9nique.<\/span><\/strong><\/p>\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t<\/div>\n\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t<\/section>\n\t\t\t\t

                                                  \n\t\t\t\t\t\t
                                                  \n\t\t\t\t\t
                                                  \n\t\t\t
                                                  \n\t\t\t\t\t\t
                                                  \n\t\t\t\t
                                                  \n\t\t\t\t\t

                                                  R\u00e9f\u00e9rences<\/h2>\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t
                                                  \n\t\t\t\t
                                                  \n\t\t\t\t\t\t\t\t\t
                                                  1. Atashi, F. ; Jaconi, M.E. ; Pittet-Cuenod, B. ; Modarressi, A. Autologous platelet-rich plasma : a biological supplement to enhance adipose-derived mesenchymal stem cell expansion. Ing\u00e9nierie tissulaire. Partie C, M\u00e9thodes 2015, 21, 253-262, doi:10.1089\/ten.TEC.2014.0206.<\/span><\/li>
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                                                    \u00a0<\/p>

                                                    \u00a0<\/p>\t\t\t\t\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t<\/div>\n\t\t\t\t

                                                    \n\t\t\t\t
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